Trametinib(GSK1120212) MEK 1/2抑制实验说明
基本信息
Trametinib(曲美替尼,GSK1120212)是一种有效的，高特异性MEK 1/2抑制剂，对MEK1和MEK2 抑制的IC50分别为0.92 nM，1.8 nM。其对180多种激酶（包括B-Raf、c-Raf、ERK1/2和MEK5等）的抑制率较低。它还能够激活自噬功能，并诱导凋亡。
货号：ajci11258
又名：Trametinib, GSK-1120212, GSK1120212, Mekinist, JTP74057, JTP-74057，曲美替尼
化学名：N-[3-[3-cyclopropyl-5-(2-fluoro-4-iodoanilino)-6,8-dimethyl-2,4,7-trioxopyrido[4,3-d]pyrimidin-1-yl]phenyl]acetamide
CAS：871700-17-3
分子式：C26H23FIN5O4
分子量：615.39
溶解：DMSO：≥ 15.38mg/mL
纯度：＞99%
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体外活性
对不同亚型的Raf和MEK来说，Trametinib（GSK1120212）均抑制MBP的磷酸化（IC50:0.92至3.4nM）。Trametinib对c-Raf，B-Raf，ERK1和ERK2的激酶活性没有抑制作用。已知具有组成型活性 B-Raf 突变体的 HT-29 和 COLO205 细胞对Trametinib最敏感，显示出亚纳摩尔IC50值。 带有 K-Ras突变的细胞系对Trametinib表现出广泛的敏感性 [1]。 在 KRAS 突变细胞系中，证明了上皮-间质转化的表达模式的细胞系对 GSK1120212 不太敏感。 来自某些不知道携带频繁 RAF/RAS 突变的细胞系的一部分似乎也对 GSK1120212敏感 [2]。
体内活性
0.3 mg/kg 和 1 mg/kg 的 Trametinib（JTP-74057 ）均能有效抑制 HT-29 异种移植物的生长，而 1 mg/kg 的 JTP-74057 几乎完全阻断了肿瘤的生长。 在用 1 mg/kg JTP-74057 治疗的小鼠中，既没有观察到体重的显着变化，尸检时也没有观察到明显的损伤。 单次口服 1 mg/kg JTP-74057 可完全抑制已建立的肿瘤组织中 ERK1/2 的磷酸化，并且在 JTP-74057 治疗 14 天后 p15INK4b 和 p27KIP1 蛋白水平均上调 [1]。 JTP-74057 阻断了 PBMC 产生的肿瘤坏死因子-α 和白细胞介素 6。 0.1 mg/kg JTP-74057 几乎完全抑制了 AIA 和 CIA 的发展。 在 CIA，JTP-74057 体外抑制胶原反应性 T 细胞增殖 [3]。
激酶实验
Raf-MEK-ERK级联激酶测定：将非磷酸化髓鞘碱性蛋白（MBP）包被在ELISA板上，并且将B-Raf/c-Raf的活性形式与未磷酸化的MEK1/MEK2和ERERK2在10μMATP和12.5 mM MgCl中混合，MOPS缓冲液含有各种浓度的Trametinib（GSK1120212）。MBP的磷酸化由抗磷酸化MBP抗体检测。[1]
细胞实验
将指数生长的细胞在96孔组织培养板中预培养24小时，然后用Trametinib（GSK1120212）处理。通过基于磺酰罗丹明B的体外毒理学测定试剂盒测定细胞生长。对于细胞凋亡测定，收集漂浮细胞和贴壁细胞并用 70% 乙醇固定。 用 PBS 洗涤后，将细胞悬浮在 100 μg/mL RNase 和 25 μg/mL 碘化丙啶 (PI) 中，并在 37 °C 下避光孵育 30 分钟。 使用流式细胞仪 Cytomics FC500 或 Guava EasyCyte plus 测定每个单细胞的 DNA 含量。（仅供参考） 细胞系：HT-29、HCT-15、HCT116、COLO205、LS-174T、SW480、SW620、T84、 LoVo 和 COLO320。[1]
动物实验
使用雌性 BALB/c-nu/nu 小鼠。 第0天，分别将悬浮在冰冷HBSS（-）中的HT-29细胞或COLO205细胞以5×106细胞/100μL/位点或1×106个细胞/100μL/位点皮下接种到小鼠右侧 。 将乙酸溶剂化形式的曲美替尼 (JTP-74057, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg) 溶解在 10% Cremophor EL-10% PEG400 中，从平均肿瘤体积达到 100 mm3发生之日起每天口服一次，持续 14 天 。 给药开始后每周两次使用微量规测量肿瘤长度[L(mm)]和宽度[W(mm)]，并使用以下公式计算肿瘤体积：肿瘤体积(mm3)=L×W ×W/2。[1]
质检谱图：
核磁氢谱：选取氘代DMSO作溶剂，从谱图可以看出各氢归属及数量与产品结构完全一致，且无杂质峰，纯度＞99%。
参考文献：
[1]. Yamaguchi T, et al. Antitumor activities of JTP-74057 (GSK1120212), a novel MEK1/2 inhibitor, on colorectal cancer cell lines in vitro and in vivo. Int J Oncol, 2011, 39(1), 23-31.
[2]. Jing J, et al. Comprehensive predictive biomarker analysis for MEK inhibitor GSK1120212. Mol Cancer Ther. 2012 Mar;11(3):720-9.
[3]. Yamaguchi T, et al. Suppressive effect of an orally active MEK1/2 inhibitor in two different animal models for rheumatoid arthritis: a comparison with leflunomide. Inflamm Res, 2012, 61(5), 445-454.
