Calcein-AM和PI染色原理及使用说明
Calcein-AM基本信息
Calcein-AM（钙黄绿素乙酰氧基甲酯）是一种非荧光，能渗透细胞的染料，在细胞内被油酯酶催化水解，将其转化为钙黄绿素（Calcein）后，能发出强烈的绿色荧光。因其只对活细胞染色，与其它同类型染料(BCECF, AM 和 CFDA)对比，Calcein-AM 对细胞毒性非常低，荧光强度在一定程度上与细胞的活力成正比，所以常用于细胞活力测定，区分活细胞和死细胞。在细胞治疗与药物筛选时，也可以用Calcein-AM染色，评估药物对病变细胞的治疗效果。
货号：ajce52364
别名：Calcein-AM，Calcein acetoxymethyl ester，钙黄绿素乙酰氧基甲酯，Calcein AM，钙黄绿素 AM
溶解度：10 mg/mL，in EtOH、MeOH、DMSO、DMF
CAS：148504-34-1
分子式：C46H46N2O23
分子量：994.86
存储：Store at -20°C
注：因Calcein-AM在溶液中稳定性较差，建议购买固体粉末，现配现用。
| 包装（需要更多包装请咨询） | 价格（￥） | 纯度 | 库存 | 购买 |
| 100μg（2mg/mL*50μL in DMSO） | 650 | ＞98% | 现货 | 点击此处购买 |
| 500μg（2mg/mL*250μL in DMSO） | 1200 | ＞98% | 现货 | |
| 1mg | 1800 | ＞98% | 现货 | |
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Calcein-AM染色原理及使用步骤
因为油酯酶存在于活细胞中，Calcein-AM能对活细胞染色，当其透过细胞膜后由没有荧光转化为Calcein绿色荧光（激发/发射波长为：494nm/514nm），同时Calcein-AM经常和核染色染料碘化丙啶（PI;Propidium Iodide）联用，PI（红色荧光，激发/发射波长：535/617nm）对死细胞染色，两者可单独染，或者混合染色。
简要步骤为：1.分别配制Calcein-AM和PI溶液；2.分别取一定量的Calcein-AM和PI溶液于PBS中，配制一定浓度混合溶液；3.对贴壁细胞进行消化处理，制备成细胞悬浮液；4.离心悬浮液，去除上层清液，加入PBS重悬细胞(注：多次离心，洗涤，除去培养基中的油酯酶)；5.取细胞悬浮液，加入混合染色液，在37℃下孵育15分钟（不同细胞可能孵育时间有所差异）；6.取一定量孵育后的染色细胞加到盖玻片上，用荧光显微镜在494±10nm激发，可观察到绿色的活细胞，再调至535±10nm激发，观察红色死细胞，记录各组荧光强度。(仅供参考)
不同细胞染色浓度有所差异，建议做实验前寻找最适浓度，参考方法：1.分别配制一定浓度梯度的Calcein-AM和PI(Propidium Iodide)染色液；2.制备死细胞（可以用70%乙醇孵育30-60分钟）；3.用Calcein-AM分别染死细胞和活细胞，寻找没有染上死细胞，又能染活细胞的浓度，且清晰可见；再用PI染活细胞和死细胞，寻找没有染上活细胞，又能染上死细胞的浓度，且清晰可见。
染色示例
Calcein-AM/PI(Propidium Iodide)联用染色，调节激发波长，可清晰观察到活细胞和死细胞。如下图[1]
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| 品名 | 纯度 | 包装/价格（可按需分装） | 库存 | 购买 |
| PI(Propidium Iodide;碘化丙啶) | ＞98% | 10mg/350;50mg/850;100mg/1350 | 现货 | 点击购买 |
| Calcein (Fluorexon) | ＞98% | 100mg/350 | 现货 | 点击购买 |
参考文献:
[1]Kuksin D, Kuksin CA, Qiu J, et al. Cellometer image cytometry as a complementary tool to flow cytometry for verifying gated cell populations. Anal Biochem. 2016 Jun 15;503:1-7.
[2]. Wang XM, et al. A new microcellular cytotoxicity test based on calcein-AM release. Hum Immunol. 1993 Aug;37(4):264-70.
[3]. Braut-Boucher F, et al. A non-isotopic, highly sensitive, fluorimetric, cell-cell adhesion microplate assay using calceinAM-labeled lymphocytes. J Immunol Methods. 1995 Jan 13;178(1):41-51.
[4]. Bratosin D, et al. Novel fluorescence assay using calcein-AM for the determination of human erythrocyte viabilityand aging. Cytometry A. 2005 Jul;66(1):78-84.
