Lyso Tracker Red溶酶体荧光探针的使用
Lyso-Tracker Red基本信息
Lyso-Tracker Red是溶酶体红色荧光探针，也属于Bodipy染料家族成员之一，最大激发/发射波长是577/590 nm。由于结构上有Bodipy的荧光基团和弱碱基，同时具备一定的脂溶性，使得可以穿过细胞膜，选择性地在酸性环境下聚集到溶酶体上，并发出红色荧光，广泛用来观察溶酶体内部生物合成及相关发病机理。
货号: ajcx12178
CAS: 231946-72-8
别名: Lyso Tracker Red DND-99;Bodipy 577/590;Lyso-Tracker Red
分子式: C20H24BF2N5O
分子量: 399.25
纯度: >98%
溶解度:DMSO : 5 mg/mL (12.52 mM; Need ultrasonic)
储存: Store at -20°C, protect from light
| 包装（需要更多包装请咨询） | 价格（￥） | 纯度 | 库存 | 购买 |
|---|---|---|---|---|
| 1mg | 700 | ＞98% | 现货 | |
| 5mg | 3000 | ＞98% | 现货 | |
| 10mg | 5500 | ＞98% | 现货 |
实验原理
Lyso-Tracker Red是一种碱性荧光染料，它能够在细胞内的酸性环境下结合到溶酶体上。由于溶酶体内的pH通常较低（约4.5-5.5），Lyso-Tracker Red能够特异性与溶酶体内的蛋白和脂类结合，并发出红色荧光。这使得细胞内的溶酶体能够通过荧光显微镜清晰可见，从而定量分析细胞溶酶体的数量、大小和活性等特征。
Lyso Tracker Red用来标记溶酶体的实验步骤
1.配制储备液：通常配制1mM作为储备液，以1mg包装为例，只需加入2.5mL的DMSO即为1mM，在溶解时可适当水浴加热，超声以助溶。Lyso Tracker Red的工作液浓度比较稀，一般用50nM即可。
2.细胞处理：将要研究的细胞进行培养，并在合适的时间点进行处理，如对实验组添加药物刺激。
3.细胞悬浮染色:（1）悬浮细胞：悬浮细胞经4°C、1000g离心3-5分钟，弃去上清液，使用PBS清洗两次，每次5分钟。（2）贴壁细胞：使用PBS清洗两次，加入胰酶消化细胞，消化完成后经1000g离心3-5min。（3）使用0.5-1mL工作液重悬约106个细胞，室温避光孵育5-30分钟。不同细胞最佳孵育时间不同，请根据具体实验需求自行摸索。（4）孵育结束后，经1000g离心5分钟，去除上清液，加入PBS清洗2-3次，每次5分钟。（5）用预温的无血清细胞培养基或PBS重悬细胞，通过荧光显微镜或流式细胞术观察。
4.细胞贴壁染色:（1）在无菌盖玻片上培养贴壁细胞。（2）从培养基中移走盖玻片，吸出过量的培养基，将盖玻片放在潮湿的环境中。（3）从盖玻片的一角加入100μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。（4）室温避光孵育5-30分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。（5）孵育结束后吸弃染料工作液，用预温的培养液洗盖玻片2~3次。
染色效果示意图如下：
(C，D）为有或没有CQ(氯喹)（10μM）的ZAS( zymosan activation serum)4小时后，通过用Lyso-Tracker Red（酸性细胞内区室的指示剂）染色，发现溶酶体的酸化受损。使用共聚焦显微镜获得图像，并使用Leica共聚焦软件量化细胞中 Lyso-Tracker Red 的平均荧光强度。（E，F）从Lyso-Tracker Red染色后进行流式细胞术分析获得的代表性直方图表明，在含有ZAS有或没有CQ（10μM）4小时后，细胞中的Lyso-Tracker Red信号和平均荧光强度降低。实际检测效果会因实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，数据来源scientific reports,Article number: 8643 (2017).
