CY5-SE实验说明
Cy5-SE是一种用于标记肽, 蛋白质, 寡核苷酸的氨基基团的反应染料。激发波长649nm, 发射波长670nm。
货号：ajce55784
又名：Cy5 NHS Ester;Sulfo-Cyanine5 Succinimidyl Ester
溶解：DMSO : 25 mg/mL (33.16 mM; Need ultrasonic)
CAS：146368-14-1
分子式：C37H43N3O10S2
分子量：753.88
存储：Store at -20°C
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用途：花菁染料Cy5，常被应用于生物分子标记，荧光成像及其他荧光生物分析。他们广泛应用于多肽，蛋白，核苷酸等。Cy5染料具有增强荧光结合后的蛋白质。
实验步骤（仅供参考）
水溶性Cy5 NHS标记 (D-ser2)-leucineenkephalin
1. Cy5 NHS 1.0 mg 溶解于400 μL DMSO后，加入到1mL 的玻璃瓶中盛有(D-ser2)-leucine-enkephalin acetate ( 0.75 mg) 的400 μL DMSO溶液。(Dye 和peptide 投料比是 1:1)
2. 然后加入15 μL三乙胺，常温避光搅拌反应混合物过夜。
3. 用HPLC 纯化蛋白，使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm)，每次上样注入2×400 μL，30分钟梯度洗脱
从0.1% TFA水溶液到MeCN∶H2O(0.1% TFA)=70∶30，流速4mL /min。(对不同的蛋白选择不同的合适HPLC梯度流动相)
4. 收集适当的色带峰，标记多肽的保留时间比未标记的多肽长。
5. 产品冷冻干燥成粉末或在水溶液中，-20℃避光储存;必要时可用质谱表征。
6.CyDye标记的蛋白稳定性取决于蛋白本身。例如标记的IgG在4 ℃可避光保存2月;
更长期的保存需加入等体积的甘油-20 ℃避光保存。
F/P计算：
Cy5 在650 nm 的摩尔吸光系数为250 000 M-1 cm-1 ，所用蛋白在280 nm处的摩尔吸光系数为 170000 M-1 cm-1;
Cy5在280nm处的吸收是650nm处的5%。按以下公式计算F/P值。
[Cy5 dye] = (A650)/250 000
[peptide] =[A280 -(0.05×A650)]/170000
F/P final= [dye]/[peptide]= {0.68×A650}/ {A280 - (0.05×A650)}
